依鲁替尼(ibrutinib)、亿珂(imbruvica)诱导的神经炎症反应-

南亚先生
南亚先生
南亚先生
13677
文章
0
评论
2021年3月27日13:01:24依鲁替尼(ibrutinib)、亿珂(imbruvica)诱导的神经炎症反应-已关闭评论
摘要

为了确定使用依鲁替尼进行的预处置是否会在体内改变LPS诱导的神经炎症,每日对腹腔内(ip)给予依鲁替尼(10 毫克/kg)或赋形剂的小鼠连续3天,然后注射LPS

  为了确定使用依鲁替尼(ibrutinib)(亿珂(imbruvica))进行的预处置是否会在体内改变LPS诱导的神经炎症,每日对腹腔内(ip)给予依鲁替尼(ibrutinib)(10 毫克/kg)或赋形剂的小鼠连续3天,然后注射LPS或PBS。注射LPS或PBS后三小时,给小鼠灌注并用4%多聚甲醛(PFA)溶液固定,然后快速冷冻大脑组织,并使用低温恒温器(35微米厚)切片。对每个脑切片进行免疫组织化学染色。用PBS冲洗脑切片,并在室温下用含0.2%Triton X-100和0.5%BSA的PBS透化1小时。随后将组织切片与第一抗Iba-1,抗GFAP,抗COX-2或抗IL-1β抗体在4°C下孵育过夜。

  第二天,将组织切片用0.5%BSA洗涤3次,并在室温下与生物素偶联的抗兔二抗孵育1小时。然后将切片用0.5%BSA冲洗,并在抗生物素蛋白-生物素复合物溶液中于室温孵育1小时。用0.1 M磷酸盐缓冲液(PB)洗涤切片3次后,通过将切片与0.5 毫克/ml 3,-二氨基联苯胺在含有0.003%H2O2的0.1 M PB中孵育来检查讯号。将切片用0.1 M PB冲洗并安装在明胶包被的载玻片上,并在明场显微镜(Leica)下捕获图像。使用-评估细胞活力-二苯基溴化四氮唑(MTT)分析。

  将BV2小胶质细胞接种在96孔板中,并在不存在FBS的情况下,用各种浓度的依鲁替尼(ibrutinib)处置24小时。然后将细胞用0.5 毫克/ml MTT处置,并在5%CO2培养箱中于37°C孵育3小时。在580nm处测量吸光度。从1日龄的Sprague-Dawley大鼠的大脑皮层中培养大鼠原代混合神经胶质细胞。简而言之,将皮质在含有10%FBS /青霉素-链霉素溶液(5000单位/ ml青霉素,5毫克/ml链霉素)的高葡萄糖DMEM中研磨成单细胞,并铺板放入75 T烧瓶(0.5半球/烧瓶)中放置2周。

  为了收获大鼠原代小胶质细胞,将烧瓶以120 rpm的速度连续摇动2h,以促进小胶质细胞从烧瓶中脱离。随后收集液体培养基,并以1500 rpm离心15分钟,然后将细胞沉淀重悬于板中,每孔培养1××105个细胞。使用0.1%胰蛋白酶收获烧瓶中剩余的细胞以获得原代星形胶质细胞。将这些原代星形胶质细胞和原代小胶质细胞在预先涂有聚-d-赖氨酸的12孔板中培养.BV2小胶质细胞用4%多聚甲醛固定10分钟,用PBS洗涤3次,然后在GDB缓冲液(0.1%明胶,0.3%Triton X-100、16 mM磷酸钠,pH 7.4和450 mM)中与抗CD11b和抗IL-1β或抗CD11b和抗COX-2抗体一起孵育NaCl)在4°C下过夜。

  第二天,将细胞用PBS洗涤3次,并与以下第二抗体在室温下孵育1小时:Alexa Fluor 488偶联的抗小鼠和Alexa Fluor 555偶联的抗兔。将细胞安装在含DAPI的溶液中,并使用共聚焦显微镜从单个平面捕获图像,并使用ImageJ软件进行分析。使用6-10张独立图像以盲法分析样品。为了检测依鲁替尼(ibrutinib)是否会影响IL-1β水平,我们进行了酶联免疫吸附试验(ELISA)。简而言之,将BV2小胶质细胞用依鲁替尼(ibrutinib)(500 nM)或溶媒(1%DMSO)处置30分钟,用LPS(100ng/ml)或PBS处置24小时。

  然后使用条件培养基进行IL-1βELISA。根据制造商的建议,使用了小鼠IL-1βELISA试剂盒。重组小鼠IL-1β蛋白用作标准。使用酶标仪在450 nm处测量样品的吸光度。为了确定依鲁替尼(ibrutinib)是否会影响ERK,P38,JNK和AKT讯号传导,将BV2小胶质细胞用依鲁替尼(ibrutinib)(1μM)或溶媒(1%DMSO)1小时,然后LPS(1μg/ ml)或PB
依鲁替尼(ibrutinib)、亿珂(imbruvica)诱导的神经炎症反应-
S 45分钟。最后的温育后,将细胞用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂片剂的RIPA缓冲液裂解。如前所述进行蛋白质印迹分析,并使用Fusion软件或ImageJ软件分析图像。如前所述进行伤口愈合分析。简而言之,看到了BV2小胶质细胞。现如今依鲁替尼(ibrutinib)的价钱是好多?更多详情可咨询下方【微信:yaodaoyaofang】。

药道网—药到病除,助力生命。汇聚全球药品资讯:印度TYKERB哪里购买

继续阅读
药道全球直邮药房客服微信:yaodaoyaofang (敬请保留,以备急用!)
weinxin
客服微信
全程为您提供顾问式服务!