艾曲波帕(eltrombopag)、艾曲泊帕对TpoR的激活是否具有特异性-

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2021年2月4日14:03:57艾曲波帕(eltrombopag)、艾曲泊帕对TpoR的激活是否具有特异性-已关闭评论
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艾曲波帕(艾曲泊帕)属于biarylhydrazone类的化合物,与C25H22N4O4的实验式,分子量约为442D。艾曲波帕(艾曲泊帕)证明半最大有效浓度(E

  艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)分子结构与表征  

  艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)属于biarylhydrazone类的化合物,与C25H22N4O4的实验式,分子量约为442D。艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)证明最大有效浓度(EC50)0.27μM与荧光素酶报告基因在小鼠BAF3细胞转染的指南下STAT-activatedIRF-1启动子和人类TpoR(BAF3/IRF-1/hTpoR),因为艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)是特定于人类和黑猩猩TpoR,未转染hTpoR(BAF3/IRF-1)的亲本小鼠BAF3细胞系,未被艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)激活。在巨核细胞特异性启动子gpIIb的引导下,通过荧光素酶报告基因试验,艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)和rhTpo在htpo转染的32D-mpl细胞中均表现出活性。 

 

  艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)结合的特异性  

  为了确定艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)对TpoR的激活是否具有特异性,我们对依赖其他细胞因子生长的细胞系进行了测试。在各种不同的检查中,艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)在表达受STAT激活的造血生长因子受体的细胞中无活性,这些因子包括Epo、G-CSF、干扰素(IFN)-血清、IFN-血清和IL-3。由双芳基腙类化合物定义的药效团具有独特的物种特异性。在电泳迁移率改变分析测量统计激活诱导的化合物,包括艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕),激活在人类和黑猩猩只发现血小板。一个氨基酸差异在跨膜域(499人类TpoR组氨酸)假设负责这个物种特异性。对艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)和具有类似药品团的化合物作用机制的研究表明,艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)通过与金属离子(即Zn2+)以及TpoR跨膜和近膜域内的特定氨基酸结合激活受体。  

  激活TpoR讯号通路  

  Westernblotting测定,TpoR通过与艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)互相作用而激活,可诱导类似于rhTpo诱导的细胞内讯号通路,但强度较小。N2C-Tpo细胞是tpo依赖的人细胞系,内源性表达TpoR。将N2C-Tpo细胞与艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)以30-mol/l的浓度孵育后,Westernblots上的抗磷-STAT5抗体检查到STAT5的激活。在艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)处置后60分钟观察到最大讯号强度。艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)的活化过程与75ng/mlrhTpo的活化过程相似。艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)(10个mol/l)也激活p42/44MAPK,其激活动力学与rhTpo(50ng/ml)相似。用rhTpo或艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)处置来自CD34+细胞的巨核细胞30分钟后,检查STAT5磷酸化,显示rhTpo可检查到STAT5的激活。与N2C-Tpo细胞一样,艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)对巨核细胞STAT5的激活呈剂量依赖性,但远低于rhTpo诱导的讯号水平。  

  刺激哺乳动物细胞和细胞系的增殖和分化  

  在对BAF3/hTpoR细胞进行的BrdU检查中,艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)在EC50为0.03mol/l的条件下孵育2天后可促进细胞增殖。  

  除了对巨核细胞谱系细胞的增殖作用外,艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)还能诱导造血干细胞分化为定向巨核细胞祖细胞。通过测量巨核细胞特异性标记糖蛋白CD41在人骨髓样本CD34+细胞上的外观,能够确定巨核细胞成熟的评估。数据以rhTpo最大有效剂量(即100ng/ml)对最大细胞数产生反应的百分比计算。艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)可延长骨髓CD34+细胞向CD41+巨核细胞的分化,其EC50为0.1mol/l。  

  利用N2C-Tpo细胞中胸苷掺入试验来确定艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)与rhTpo联合医治的效果。结果表明,艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)与Tpo不存在拮抗作用;相反,当将艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)添加到低于最好数量的rhTpo中时,似乎会出现加性效应。当rhTpo存在时,也会出现加性效应,其浓度会导致细胞增殖率出现高原(即100ng/ml)。  

  在艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)和rhTpo孵育的细胞中检查Caspase-3和Caspase-7  

  的试验测量激活caspase-3caspase-7,医治与rhTpoN2C-Tpo细胞浓度为0,1和3ng/ml,和艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)浓度在0-0.03μM,展示了类似的半胱天冬酶活动未经处置的细胞,这表明这些rhTpo浓度和艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)不足以防止N2C-Tpo凋亡细胞。当艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)>浓度为0.03mol/l时,半胱天冬酶的裂解活性减少,证明了抗凋亡作用。延长浓度的艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)在这些细胞中显示了额外的抗凋亡作用。10、30或100ng/mlrhTpo孵育的细胞也表现出半胱天冬氨酸酶活化减少和对这些细胞的抗凋亡作用。因此,Tpo和艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)都可以阻止Tpo依赖的细胞凋亡,并且能够在每个医治的次优水平上互相替代。  

  在黑猩猩身上进行的重复剂量研究  

  鉴于艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)在人类和黑猩猩血小板中STAT激活的独特物种特异性,我们在五只雌性黑猩猩中进行了为期5天、重复剂量的安全特性和药理学研究。研究人员区别给黑猩猩单独使用(n=2)和“艾曲波帕(eltrombopag)”(n=3);10毫克/kg/天)口服。重复
艾曲波帕(eltrombopag)、艾曲泊帕对TpoR的激活是否具有特异性-
口服给药后,给药的耐受良好。对血液学、凝血或临床化学参数均无不良影响。在接受艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)医治的黑猩猩中,在最后一次注射大约1周后,其中一只黑猩猩的血小板计数延长了2倍以上,另外两只黑猩猩则延长了约1.5倍。血小板计数在高达峰值后约2周恢复到接近基线值。 

  尽管只有有限的药代动力学三黑猩猩进行采样,数据表明,血小板计数变化的药效学讯号基线的艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)黑猩猩发现至少浓度(Cmin),Cmax,和曲线下的面积(AUC)值约为0.107μg/ml,0.525μg/ml,区别和12.1μgh/毫升。艾曲波帕(eltrombopag)(艾曲泊帕)怎么选购?详情请扫码咨询:

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